RSR AQP4Ab 抗体检测试剂盒是世界上在该项目上同时获得CE和美国FDA认证的产品，FDA 510(K）注册编号：K161951； 中国CFDA注册受理号：JSZ1800016

1.检测前准备工作：

(1)请确保试剂盒在使用前已在室温环境下(20-25℃)回温。

(2)核准本次检测涉及样品数，规划好板面布局。

(3)使用剪刀或其他物品打开试剂盒内微孔板的铝箔包装，取出微孔板，将本次检测不涉

及的多余板条卸除，妥善放回铝箔包中。铝箔包内应放置随装的干燥剂并以胶带封好开口，装回自封袋中随试剂盒冷藏保存。

(4)对空白孔做好标记。

(5)取出试剂盒内的浓缩洗液(concentrated wash solution)，以纯水十倍稀释浓缩液。总量根

据样品数决定，手工洗板一般用量为500mL/半板。

(6)准备一块ELISA 微孔板盖或若干ELISA 板封口膜。

(7)观察样品性状。新鲜血清或冻存血清应在室温下保持澄清，如发现浑浊或溶血请在

13000RPM 下离心5 分钟，并在接下来的检测中只使用澄清部分。

2.检测流程

(1)取出试剂盒内的AQP4-生物素(AQP4-biotin)和复溶缓冲液(reconstitution buffer)，每瓶冻

干粉使用移液器加入1.5ml 复溶缓冲液复溶。复溶瓶数根据本次检测样品量决定，每瓶生

物素可供50-55 孔使用，单次未使用完的已溶解生物素可在2-8℃中存放3 天。

(2)使用移液器向每孔中分别加入标准品(Calibrator)，对照品(Negative control&Positive

control)以及患者血清50uL。加样顺序中建议标准品按照先阴性质控品、后标准品由低到

高顺序加样。

(3)除空白孔外使用移液器向每孔中加入25ul 复溶的AQP4-生物素

(4)完成加样后盖好微孔板盖，将微孔板放置于酶标板水平摇床上，按500 次/分钟频率振

荡总计两小时。

(5)取出试剂盒内的链霉亲和素过氧化物酶(SA-POD)和稀释液(diluent for SA-POD)，按

照每0.1mlSA-POD 需加1.9ml 稀释液进行二十倍稀释。一般情况下完成整板检测需用

0.6mlSA-POD 与11.4ml 稀释液。推荐使用单独容器盛放稀释后的SA-POD，非特殊情况不

推荐在SA-POD 瓶内直接稀释。

(6)完成孵育后将微孔板取下，打开板盖，采取快速翻转的方式将孔内液体拍净。使用洗

瓶/多道移液器/洗板机抽取稀释完成的洗液进行洗板，每孔洗涤三次。完成后将微孔板倒

扣在吸水纸上拍打以除去多余洗液。若采用自动洗板机则可设定抽取量1mL，加液量

300uL，振荡3-5 秒，洗涤次数为3.

(7)除空白孔外每孔中加入稀释好的SA-POD 100ul。盖好板盖室温使用水平摇床500 次/分

振荡20 分钟。

(8)重复步骤6.如采用手工洗板，完成三次洗液洗板后追加一次纯水洗板，用以除去泡沫。

(9)请注意:此步骤中包含空白孔。

使用移液器向每孔中加入100ul 显色底物(TMB，棕色瓶)，在避光处放置20 分钟，请勿

振荡。

(10)此步骤中包含空白孔。使用移液器向每孔中加入100ul 终止液(stop solution)，可观察

到显蓝色的微孔变为亮黄。

(11)盖好板盖，使用水平摇床或手工振荡微孔5 秒，保证微孔内显色过程充分停止。

3.读数及数据处理

(1)读数仪器的调整

检测读数需使用具有读取特定波长的吸光度功能的仪器。推荐使用全波长酶标仪或具备

450nm 及405nm 滤光片的酶标仪；本实验推荐在检测步骤9 时打开仪器预热，以取得稳

定的波长利于读数。

(2)读取吸光度

打开计算机，在控制软件中打开已准备好的读板方案，在板面布局中按照本次检测样品数

目更改样品布局。完成设定后点击”Read”开始读板。

(3)完成读数后将结果按读板方案中的报告单模板输出至LIS 系统，打印报告单。

4.检测后工作

(1)读数完毕的微孔板应小心拆下已使用的板条，请勿将孔内液体溅出。将已使用的板条

按医疗废物处理。

(2)空板架使用*或其他方式妥善清洁后保存，推荐放回试剂盒微孔板的自封袋内。

(3)本次检测未使用干净的复溶生物素及稀释的SA-POD 可留作下次检测使用，随试剂盒其

他成分一并冷藏(2-8℃)贮存。

(4)洗液及浓缩洗液推荐冷藏贮存。