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浅析放射免疫法试剂盒方法原理
发布时间:2020-07-23   点击次数:64次
   放射免疫法试剂盒方法原理:
  该方法以放射免疫测定的竞争性结合原理为基础。标准品和未知样品包被管中一起温育,抗体包被于试管底部。温育后将管内物质吸出或倒出,计数。在1~60μg/dl 范围内,以5 个血清标准坐标准曲线,未知样品值可从标准曲线中查得。整个反应在包被管中进行。对于血清,尿液或血浆样本来说,未分离样本的稀释,蛋白质的变性或提取步骤是必须的。除了非提取尿皮质醇分析外,该药盒也可用于尿液中游离皮质醇的测定。首先用亚甲基氯化物提取尿液中皮质醇,将提取物的一个等份式样在包被管中直接脱水(试验证明如果使用的亚甲基氯化物,不会有损于包被管)。为确保样本中含有适当水平的蛋白质,向每个包被管中加入10μl 皮质醇血清空白,其余测定过程同血清,血浆和非提取尿皮脂醇。应监控使用亚甲基氯化物提取尿中皮)
  放射免疫(RIA)的优点
  放射免疫分析具有许多其它分析方法无可比拟的优点。它既具有免疫反应的高特异性,又具有放射性测量的高灵敏度,因此能准确测定各种具有免疫活性的极微量的物质。
  ⒈灵敏度高一般化学分析法的检出极限为10~10g,而RIA通常为10ng(纳克,ng)、10pg(皮克,pg),甚至10fg(飞克,fg)、10ag(阿克,ag)。
  ⒉特异性强由于抗原—抗体免疫反应专一性强,所被测物一定是相应的抗原。良好的特异性抗体,能识别化学结构上非常相似的物质,甚至能识别立体异构体。
  ⒊应用范围广据不完全统计,目前至少已有300多种生物活性物质已建立了RIA。它几乎能应用于所有激素的分析(包括多肽类和固醇类激素),还能用于各种蛋白质、肿瘤抗原、病毒抗原、细菌抗原、寄生虫抗原以及一些小分子物质(如环型核苷酸等)和药物(如毛地黄甙等)的分析,应用范围还在不断扩展。近年来由于小分子半抗原制备抗体的技术有很大的发展,有人预测几乎所有的生物活性物质,只要其含量不低于RIA的探测极限,都可建立适当的RIA法。
  ⒋操作简便RIA所需试剂品种不多,可制成配套试剂盒;加样程序简单一次能分析大量标本,标本用量也少;反应时间不长;测量和数据处理易于实现自动化;RIA属体外分析技术,对患者无任何辐射危害。
  放射免疫法试剂盒有三大主要要素 :标记物、标准品和抗体。此外 ,质控血清也很重要 ,是否满足质控血清的要求是简便、直接的检验试剂盒可靠性的条件。当然 ,还有一些辅助组分 ,如分离剂、缓冲液等试剂也不能忽视。
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