浅析肌联蛋白抗体检测试剂盒的使用流程
更新时间:2025-01-10 点击次数:31次
肌联蛋白抗体检测试剂盒是一种用于检测人血清或血浆中肌联蛋白抗体(TitinAb)的实验工具。该试剂盒在临床上具有重要的应用价值,尤其在重症肌无力(Myasthenia Gravis,MG)和胸腺瘤等疾病的诊断中,主要用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中的肌联蛋白抗体含量,试剂盒应保存在2-8℃的环境中,有效期为6个月。
肌联蛋白抗体检测试剂盒通常采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。这种方法通过预先包被豚鼠肌联蛋白抗体(TTN)捕获抗体的微孔板,依次加入标本、标准品和HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤后,用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅与样品中的肌联蛋白抗体浓度呈正相关,通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),即可计算出样品浓度。
在使用肌联蛋白抗体检测试剂盒时,需按照以下步骤进行:
1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl。注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2.温育:用封板膜封板后,37℃反应120分钟。
3.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干。每孔加生物素标记抗体工作液100μl,37℃温育60分钟。再次洗涤后,每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液100μl,37℃温育60分钟。洗涤5次。
4.显色:依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色30分钟。
5.终止:依序每孔加终止溶液50μl,终止反应。
6.测定:用酶标仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后15分钟以内进行检测。