新闻中心您的位置:网站首页 >新闻中心 >胰岛细胞抗体ELISA试剂盒操作流程
胰岛细胞抗体ELISA试剂盒操作流程
发布时间:2017-08-01   点击次数:428次
   胰岛细胞抗体ELISA试剂盒基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。
  胰岛细胞抗体ELISA试剂盒操作流程如下:
  (1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
  (2)酶标板置4℃,包被过夜。
  (3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
  (4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
  (5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  (6)洗板,同(4)。
  (7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
  (8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  (9)洗板,同(4)。
  (10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
  (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
  (12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
  (13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
  胰岛细胞抗体ELISA试剂盒注意事项:
  1.底物请避光保存。
  2.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
  3.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
  4.本试剂不同批号组分不得混用。
网站首页 关于我们 新闻中心 产品中心 联系我们
备案号:   GoogleSitemap   技术支持:化工仪器网 管理登陆
天津阿斯尔生物科技有限公司(www.rsrtj.cn) 版权所有 总访问量:63932
    QQ在线客服
  •   在线咨询
  • 点击这里给我发消息
电话
86-22-83726755
手机
18622601726