锌转运体8是β细胞*的跨膜蛋白，其位于胰岛素分泌颗粒中，参考膜内外锌离子浓度的调节。因此锌转运体8也成为了1型糖尿病重要的自身抗原。

一、前言

锌转运体8自身抗体主要同锌转运体8 C端结构域结合，人群基因的多态性使第325氨基酸的密码子可表达出三种蛋白质：精氨酸（R）325，色氨酸（W）325，少数情况下表达为谷氨酰胺（Q）325。锌转运体8自身抗体可以特异性识别R325、W325类，或识别非特异性残基325，极少数情况下可与Q型结合。RSR公司锌转运体8自身抗体检测试剂盒可定量检测R325、W325以及非特异性残基325型自身抗体。检测锌转运体8抗体可与检测谷氨酸脱羧酶抗体、胰岛细胞抗原2抗体等项目形成互补。相比于检测单种抗体，同时检测多项抗体阳性更具诊断价值。

二、材料与方法

1.材料

血清样本，来源：

1）94例1型糖尿病患者（T1DM）；

2）51例成人隐匿型自免糖尿病患者（LADY）；

3）59例2型糖尿病患者（T2DM）包括28例初诊断及31例不同治疗过程患者；

4）200名健康志愿者（HBD）；

5）30例格雷夫斯氏病患者；

6）20例阿狄森氏病患者。

2.方法

1）桥式ELISA法（RSR Ltd）

2）免疫沉淀分析法（immunoprecipitation assay，IPA）：35S标记ZnT8抗原，抗原类型分W325/R325二聚体，W325，R325，P325单体。

3）GADAb ELISA试剂盒、IA-2Ab ELISA试剂盒、IAA放免试剂盒，试剂盒来自RSR Ltd。

三、研究结果

1. 精密度分析

用两个质控样品（抗体浓度为50 ± 15 u/mL 和 210 ±50 u/mL）进行批间（n=6）和批内精密度(n=10)分析，中浓度ZnT8Ab批间和批内精密度分别为7.1%和1.7%，高浓度ZnT8Ab批间和批内精密度分别为8.5%和2.7%。

2. ZnT8抗体阳性检测率

用ELISA方法，ZnT8Ab阳性检出率分别为：T1DM 54.3%，LADA 31.4%，T2DM 1.7%。ZnT8Ab ELISA试剂盒检测TIDM及健康人血清样本，通过ROC分析，灵敏性为54%，特异性99%（cut-off 15U/ml），AUC为0.8（95%置信区间，0.74-0.86）。

3. 比较ELISA与IPA方法检测ZnT8

抗体

T1DM患者中，ELISA为54.3%（51/94），IPA为50%（47/94）；LADA患者中，ELISA为31.4%（16/51），IPA为29.4%（15/51）； T2DM患者中，ELISA为1.7%（1/59），IPA为3.4%（2/59）；健康对照（HBD）中，特异性分别为ELISA 99%，IPA为96.5%。

4. 线性分析

线性分析中，阳性质控及血清样本用阴性对照品进行了1:2, 1:5, 1:10, 1:20的稀释。所有样品，ELISA检测结果与IPA（W325/R325二聚体）检测结果具有很好的一致性（r=0.856, k=0.889, n=204）。在1型糖尿病患者和LADA患者中的一致性（r=0.837, k=0.875, n=145）（图4）。

5. 用多种不同的抗体检测试剂盒进行分析

T1DM患者中，对多种抗体检测，阳性率分别为：ZnT8Ab 51/94（54.3%），GAD Ab 70/94(74.5%)，IA-2 Ab 42/94(44.7%)，IAA 24/94(25.5%)。至少一种方法检测出阳性概率统计为85.1%，仅ZnT8 Ab检测阳性概率为4.3%，ZnT8Ab使阳性检出率从80.9%上升至85.1%；

LADA患者中，GAD Ab全阳性，ZnT8 Ab 16/51(31.4%)，IA-2 Ab 12/51(23.5%)， IAA 6/51(11.8%)；

28例新诊断T2DM患者中，GAD Ab检测只有1例阳性。在所有T2DM患者中（28例新诊断，31例不同时期），检出阳性患者数分别为ZnT8 Ab 1/59(1.7%)，GAD Ab 10/59(16.9%)， IA-2 Ab 2/59(3.4%)，IAA 2/59(3.4%)，至少一种抗体阳性统计结果为13/59（22%），没有ZnT8Ab单独呈阳性检出者。

30例格雷夫斯氏病患者ZnT8 Ab ELISA检测无阳性，20例阿狄森氏病患者中ZnT8Ab ELISA检测2例阳性(23.6 和48.2 U/mL)，对阳性（23.6 U/ mL）血清用GADAb及IAA检测也成阳性，IA-2Ab呈阴性。另一例ZnT8 Ab ELISA检测阳性（48.2 U/mL）因血清不足未能检测。

四、结论

桥式ELISA是一种简单且可重复的检测血清ZnT8Ab的方法，可提高成人1型糖尿病的抗体阳性检出率。
 

参考文献：Dunseath G, Ananieva-Jordanova R, Coles R, et al. Bridging-type enzyme-linked immunoassay for zinc transporter 8 autoantibody measurements in adult patients with diabetes mellitus[J]. Clinica Chimica Acta, 2015, 447: 90-95.