技术文章您的位置:网站首页 >技术文章>小鼠单克隆抗体制备流程
小鼠单克隆抗体制备流程
发布时间:2020-09-18   点击次数:27次
       小鼠单克隆抗体的相关内容介绍:
   单克隆抗体是人工制备的杂交瘤细胞生产的,杂交瘤细胞是由一个经抗原激活后的B细胞与骨髓瘤细胞融合形成。单克隆抗体优点:纯度高,灵敏度高,特异性强,交叉反应少,制备的成本低。缺点:对技术有一定的要求,而且通过抗原的化学处理很容易丢失表位。
  单克隆抗体技术可应用在:蛋白质的精细结构研究、淋巴细胞亚群的表面新抗原分析、组织相容性抗原检测、激素和药物的免疫分析、肿瘤的定位和分类、纯化微生物和寄生虫抗原、免疫治疗和与药物结合的免疫—化学疗法等。其中在免疫治疗的应用中,单克隆抗体药物发挥了重要作用:利用单克隆抗体与靶细胞特异性结合,可将药物带至病灶部位,可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的研究,为肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔的前景。
  小鼠单克隆抗体制备流程:
  1.抗原准备:原核表达蛋白抗原,或者设计合成多肽并偶联KLH。选择原核表达蛋白抗原的客户,可自己提供纯化好的抗原(纯度>85%),拓普生物也能为你纯化蛋白,从构建原核表达质粒,到获得纯化蛋白。选择多肽偶联的客户,抗原由拓普生物准备,合成。
  2.抗原免疫:免疫4只balb/c小鼠,并通过标准程序加强免疫,尾部采血进行ELISA检测,验收标准为血清ELISA>10,000。
  3.细胞融合和筛选:显示较佳免疫应答的balb/c小鼠,将其脾细胞和骨髓瘤细胞融合,通过HAT选择性培养基筛选杂交瘤细胞。
  4.杂交瘤细胞筛选:有限稀释法对杂交瘤细胞进行筛选,对2-5个阳性母细胞进行亚克隆,并选一个亚克隆做亚型鉴定。
  5.单克隆抗体大量制备:选择一个阳性克隆腹腔注射到5只balb/c小鼠进行腹水生产。
  6.单克隆抗体纯化:使用ProteinA/G纯化抗体,并用ELISA检测抗体效价。
  小鼠单克隆抗体注意事项:
  1.请根据实验需要选择最适工作效价,部分实验根据具体实验情况可在推荐工作效价基础上进行增加或减小。
  2.短期保存的抗体:如抗体几周内就会使用,收到后推荐在2-8℃保存,2-8℃短暂保存数周对抗体活性没有影响。
  3.长期保存的抗体:如抗体需超过1个月后才会使用,请酌情分装后于-20℃保存。
  4.建议:将抗体保存在冰箱里层,避免温度变化造成反复冻融。
网站首页 关于我们 新闻中心 产品中心 联系我们
备案号:   GoogleSitemap   技术支持:化工仪器网 管理登陆
天津阿斯尔生物科技有限公司(www.rsrtj.cn) 版权所有 总访问量:65679
    QQ在线客服
  •   在线咨询
  • 点击这里给我发消息
电话
86-22-83726755
手机
18622601726