对称二甲基精氨酸(SDMA)是一种甲基化的精氨酸。SDMA来自于L -精氨酸残基的核内甲基化,在蛋白水解后释放到细胞质中。SDMA由肾脏排出。
几项研究发现,每3只猫和每10只狗中就有1只可能在它们的一生中患上肾病。
SDMA是肾脏功能的早期生物标志物。它与肾小球滤过率(GFR)有很好的相关性。平均而言,肾功能丧失30 - 40%的慢性肾病(CKD)患者中,SDMA增加。然而,直到75%的肾功能丧失,肌酐才会增加。兽医检测SDMA将比肌酐或胱抑素C测试更早地诊断慢性肾脏疾病(CKD)。
SDMA对肾功能有特异性。不受肝病、心血管疾病、炎症、内分泌疾病等疾病的影响。SDMA另一个令人兴奋的特点是它也不受肌肉质量的影响,这简化了对瘦的老年动物,特别是猫和患有其他导致肌肉萎缩疾病的动物CKD的诊断和监测。
竞争性的SDMA-ELISA试剂盒采用微孔板检测。SDMA与微孔板的固相结合。样品中的SDMA被酰基化,并与固相结合的SDMA竞争固定数量的兔抗SDMA抗血清结合位点。当系统处于平衡状态时,通过洗涤去除游离抗原和游离抗原-抗血清复合物。通过抗兔/过氧化物酶检测与固相SDMA结合的抗体。在450 nm处检测底物TMB /过氧化物酶反应。与固相SDMA结合的抗体量与样品中SDMA浓度成反比。
加样方案
样本准备
| 标准品 | 质控品 | 样本 |
标准品1-6 (μL) | 20 |
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质控品1和2 (μL) |
| 20 |
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样本(μL) |
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| 20 |
酰化缓冲液 (μL) | 20 | 20 | 20 |
平衡试剂 (μL) | 200 | 200 | 200 |
板子在定轨振荡器上振荡10s
酰化试剂 (μL) | 50 | 50 | 50 |
在定轨振荡器上室温孵育20分钟
每样20μL用于ELISA试验。
ELISA加样方案
| 标准品 | 质控品 | 样本 |
标准品1-6(μL) | 20 |
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质控品1和2(μL) |
| 20 |
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样本(μL) |
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| 20 |
抗血清(μL) | 50 | 50 | 50 |
盖上板膜在定轨振荡器上室温孵育90分钟
洗板4次,每次用300μL洗液
酶结合物(μL) | 100 | 100 | 100 |
在定轨振荡器上室温孵育30分钟
洗板4次,每次用300μL洗液
底物液(μL) | 100 | 100 | 100 |
在定轨振荡器上室温孵育25±5分钟
终止液(μL) | 100 | 100 | 100 |
读取450nm波长吸光度