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那些年对ELISA试剂盒选择的困惑
发布时间:2021-09-02   点击次数:61次

隔壁的实验室又发文章了,我们困在处理数据这一环,这几家的试剂盒检测数据怎么都不一样?"小编每当听到这句话,每次感受都不同。对那些努力钻研数据的学者表示深深的同情。那么,造成试剂盒检测数据不一样的原因,除了一些实验操作、实验环境等客观因素外,还有试剂盒质量参数,如重复率、批内差、批间差、线性区间、准确度(回收率)等。但是,最重要的影响因素可能是作为定量标尺的标准品。所以,下面我们就揭晓影响不同ELISA试剂盒检测数据的差异和关于标准品的几点疑惑

定量ELISA试剂盒如何进行校准?

利用国际机构的参考试剂进行校准

目前,定量ELISA试剂盒校准方法为应用NIBSC/WHO推荐的参考试剂(reference reagent对试剂盒的定量单位进行校准。例如,WHO Reference ReagentIslet Cell AntibodiesNIBSC code: 97/550。其单位规定为:每安瓿为20单位胰岛细胞抗体(Islet cell antibodies);或每安瓿为100单位抗GAD65;或每安瓿为100单位抗IA-2

 

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精准定量的基石之一:严格标准品生产

   市售ELISA试剂盒的检测指标呈多样化态势,至今已知的测定项目种类虽远远多于NIBSC/WHO推荐的参考试剂,但只有严格遵守参考试剂的定量单位所生产的标准品(如前文提到的英国国家生物制品检定所NIBSC提供的参考试剂)才是生产高质量定量ELISA试剂盒的前提条件之一。但是不同厂商的技术路线和品控标准不同,会导致成品的性能存在差异,进而造成检测数据的差异。RSR公司的自身抗体ELISA检测试剂盒在标准品生产中每个环节,严格监控是否符合以NIBSC参考试剂定标的质控范围,因此保证售出的RSR试剂盒定量准确,高特异性,结果可重复性高。

 

精准定量的基石之二:高度纯化重组蛋白

     目前,国内外的双抗原夹心法ELISA试剂盒所用抗原大多数属于纯化的重组蛋白抗原,竞争法ELISA则更加多样化,既可能为纯化的重组蛋白抗原,也可能为天然蛋白抗原提取物。对此,有些实验者担忧试剂盒中的抗原为何不使用天然蛋白,重组蛋白是否会影响检测结果?ELISA试剂盒选择纯化重组蛋白为抗原的主要原因:

 

第一,天然蛋白均存在于复杂的生物样本中,大多数在细胞或组织中表达量可能极少,不适于进行高度纯化或者纯化成本高昂,无法获得大量的天然蛋白。

第二,为保证ELISA试剂盒检测中抗体和抗原的特异性结合,在研究之初,通过筛选不同重组蛋白,使样本中的抗体与重组蛋白抗原间的亲和力和特异性达到最佳。

第三,随着蛋白表达和纯化技术的发展,高度纯化的重组蛋白和天然蛋白具有很高的活性相似度,特别是采用真核细胞表达系统,如酵母或昆虫细胞等,高度纯化的重组蛋白具有更接近自然状态的空间构象和生物活性。

 

精准定量的基石之三:科学生物样本验证

       随着国内生物技术的发展,自主研发蛋白表达纯化、抗体制备等ELISA试剂盒开发技术也在不断进步。除了应用NIBSC/WHO推荐的参考试剂对试剂盒进行校准外,也可用一些暂无机构认可,但背景信息完整的生物样本进行验证。按照科学研究方法,采用不同种属、性别、生命周期阶段、种类等因素的生物样本分别进行验证。

 

如何正确使用ELISA试剂盒的标准品?

       ELISA试剂盒的标准品需要与其他试剂盒主要组分和待测样本达到相同实验条件。请提前30分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温(20-25℃),如果试剂盒需分多次使用,请仅取出本次实验所需的酶标板条和试剂,剩余板条和试剂需按照条件保存。

       RSR ELISA试剂盒的标准品可直接使用,无需现用现配,且保存条件与试剂盒一致即可。

 

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