视神经脊髓炎谱系疾病（NMOSD）是一种主要累及青壮年人群，复发率和致残率*的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病。2019年9月27日NMPA批准了水通道蛋白（AQP4）抗体检测试剂盒（酶联免疫法）的上市，用于体外定量测定人血清中水通道蛋白抗体（AQP4 Ab）的含量。该试剂盒（RSR, AQP4 Ab Version 2）来自天津阿斯尔生物科技有限公司，注册号：国械注进20192400461。
2021年12月中国免疫学会神经免疫分会组织国内专家重磅发布了2021版《中国视神经脊髓炎谱系疾病诊断与治疗指南》（以下简称《指南》），在实验室诊断方面，较前版有较大的补充，重申了AQP4-IgG在诊断中的重要性。AQP4-IgG是具有高度特异性的诊断标志物，特异度高达90%，敏感度约为70%。
小编重点梳理了2021版《指南》中关于实验室诊断要点的更新：
指南解读-抗体检测方法
►指南
推荐使用基于细胞转染的免疫荧光技术（cell based transfection immunofluorescence assay, CBA）或流式细胞术进行血清检测。
解读：
指南中所推荐的CBA和流式细胞术大多数为实验室检测方法，高度依赖检测人员的操作水平（细胞转染水平，不同转染技术的选取，检测结果判读等）。
►指南
可使用酶联免疫吸附试验纵向监测抗体滴定度对疾病进展和治疗。
解读：
2021版《指南》较2016年版明确了抗体定量检测的意义，并充分肯定了ELISA法获得的定量结果对制定临床诊疗方案的辅助意义。
►指南
酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）灵敏度高，特异度有所降低。
解读：
我们查阅了指南的征引文献【53-55】，进一步分析文章的数据和结论来源。
灵敏度： 三例文献中ELISA法的灵敏度最高，优于间接免疫荧光(IIF)法、免疫组化(IHC)法和基于细胞的检测(CBA)法。
特异性：综合特异性排名：IIF=ELISA=CBA≥IHC
文献【53】中ELISA法的特异性最高，优于IHC法。
文献【54】中ELISA法的特异性略低于基于组织的IIF法（IIF-tissue法），与基于细胞的IIF法（IIF-AQP4，CBA法）一致。
文献【55】中ELISA法的特异性与参比方法基于组织的IIF法一致。
征引文献详解：
01 文献【53】：S. Jarius等（2012）
入组样本：共261例
● NMOSD疾病组（108例）：
66例视神经脊髓炎（NMO），25例长节段横贯性脊髓炎（LETM），14例复发性视神经炎（ON），3例非长节段横贯脊髓炎/视神经炎（NETM/ON）
● 对照组（153例）：
109例多发性硬化（MS），39例其他神经系统疾病（OND）, 5例健康对照(HC)
检测方法：
● ELISA法
RSR, AQP4 Ab Version 1
现款2代试剂盒全面优于文中1代性能
检测全部样本（261例）
● 免疫组化法
检测部分样本（207例）
检测结果（表1）
1. 灵敏度：
ELISA法灵敏度高。ELISA法灵敏度在下列疾病亚组（单发或多发症状患者）中均高于IHC法：50/66例(75.8%)NMO患者，17/25例(68%)LETM患者，3/14例(21.4%)ON患者，2/3例(66.7%)ON合并非广泛性横断脊髓炎患者。在针对性更强的NMOSD患者中，同时接受双方法学检测的结果中ELISA法仍维持更高的阳性率（10例ELISA检测单阳性，3例IHC检测单阳性）。
2. 特异性：
数据证实ELISA法特异性高于IHC法：在对照组中，151/153例(98.7%)患者呈AQP4抗体阴性（ELISA法），116/118例（98.3%）患者呈AQP4抗体阴性（IHC法）。
3. 重复性：
ELISA在AQP4抗体检测方面上具有很好的批内和批间重复性。
4. 定量意义：
血清中AQP4抗体浓度与疾病活跃程度相关(p＜0.00001)。
表1 261例患者和对照的人口学、临床和血清学结果
注：m =男性；f =女性；pLR =阳性似然比；nLR =阴性似然比；n.d.=不确定；n.a.=不适用
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02 文献【54】：Yoon-Joo Kim等（2012）
入组样本：共124例
● NMOSD疾病组（54例）：
9例NMO，32例视神经炎（ON），13例横贯性脊髓炎（TM）
● 疾病对照组（70例）：
10例MS（包括两例视神经脊髓OSMS），60例OND
检测方法：
● 组织间接免疫荧光法(IIF-tissue)
小鼠小脑组织
● CBA法(IIF-AQP4)
转染人AQP4的HEK293细胞 (EUROIMMUN, Germany)
● ELISA法
商用检测试剂盒（DLD diagnostika GmbH, Germany）
检测结果（表2）
1. 灵敏性：
ELISA法优于IIF-tissue法和CBA法。
ELISA法在NMOSD疾病组（11/54，20.4%）中和NMO疾病亚组（5/9，55.6%）中阳性检出率最高。
2. 特异性：
在疾病对照组中，三种方法的抗体阴性检出例数仅相差一例，总体特异性相差不大（IIF-tissue法为68/70，97.1%；CBA法与ELISA法特异性一样，为67/70，95.7%）。
表2 三种方法在不同疾病组患者中AQP4抗体的血清阳性率
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03 文献【55】：Tampoia M等（2019）
入组样本：共81例
● NMOSD疾病组（54例）：
24例NMO，24例LETM，13例ON，3例脊髓炎（Myelitis）
● 对照组（27例）：
17例MS，10例健康供血者（HS）
检测方法：
● ELISA法
RSR, AQP4 Ab Version 2
全自动检测系统（SkyLAB 752）
● 组织间接免疫荧光法（IIF-tissue）
基于灵长类组织
检测结果（表3）
1. 方法学间一致性强：
ELISA检测结果与参照方法IIF-tissue法的一致性达*。
2. 临床准确度：
NMO患者中检测AQP4抗体的灵敏度为83.3%，特异性为*。
3. 定量意义：
NMO患者的AQP4抗体中位数浓度高于LETM患者（p=0.00006）或其他NMOSD患者及对照组(p < 0.0001)。
4. 文章结论：
新款ELISA试剂盒在全自动化的系统上体现出较高的灵敏度和*特异性，精密度高（CV值小），可以提供客观的定量结果。
表3 患者和对照组的人口统计学、临床和血清学特征
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