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两种乙酰胆碱受体自身抗体检测法比较:酶联免疫法与放射免疫法
发布时间:2022-03-28   点击次数:439次


烟碱型乙酰胆碱受体自身抗体(AChR Ab)是重症肌无力(MG)的重要血清学标志物,血清中AChR Ab的检测对MG的诊断和治疗有重要意义。本文比较了两种测定AChR Ab的方法:放射免疫法(IPA)和酶联免疫法(竞争ELISA)。


在本研究中,在83例MG患者血清中,76例血清在ELISA法中呈阳性 (阳性率92%),72例在IPA法中呈阳性 (阳性率87%);在193例对照血清(疾病对照组和健康对照组)中,191/193例(99%)呈阴性,2例其他自身免疫性疾病的患者血清呈阳性(在对照组中,ELISA法和IPA法的结果一致)。


RSR的AChR Ab竞争ELISA法与现有金标准-放射免疫法特异性相同,灵敏度更高。此外,竞争ELISA的精密度和操作特性使其适用于大批量和小批量样品的常规测定。




入组样本


1) MG疾病组:83例MG患者的血清(IPA检测的AChR Ab浓度范围在0.14到21 nmol/L 毒素结合量);


2)疾病对照组:93例其他自身免疫性疾病患者的血清(包括42例Graves病患者血清TSHR (TR Ab)自身抗体阳性,11例桥本甲状腺炎患者血清甲状腺过氧化物酶自身抗体(TPO Ab)和/或甲状腺球蛋白自身抗体(Tg Ab)阳性,10例1型糖尿病(DM)患者血清谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD Ab)阳性,10例阿狄森氏病(AD)患者血清类固醇21-羟化酶自身抗体(21-OH Ab)阳性,10例类风湿关节炎(RF)患者血清类风湿因子(RFA)阳性,10例系统性红斑狼疮(SLE)患者血清双链DNA自身抗体(dsDNA Ab)阳性)。


上述患者组的标志物中,除类风湿因子使用Behring试剂盒测定外,其他自身抗体均采用RSR公司的试剂盒检测。


3)健康对照组:100例健康献血者(HBD)的血清(美国,Golden West)。



结果

01   ELISA法和IPA法对比


总体而言,在MG疾病组的检测上,两种检测方法(ELISA法和IPA法)的结果吻合良好(r=0.85, n=83, p<0.001)(图1)。


图1 ELISA和放射免疫法(IPA)AChRAb检测结果的相关性分析。y=0.31510.0364x;r=0.85;n=83。(A) 全尺寸。(B) 局部放大图。水平和垂直虚线分别显示ELISA和IPA临界值。


02   灵敏度分析


83例MG患者血清中有80例 (96%) 在一种或两种检测中均呈阳性。在83例MG患者血清中,76例血清在ELISA法中呈阳性 (阳性率92%),72例在IPA法中呈阳性 (阳性率87%)。与IPA法(n =72)相比,使用ELISA 法(n=76)检测到更多的MG患者样本呈AChRAb阳性(表1)。


表1 在83例MG组中IPA和ELISA法的检测结果

ELISA 法的正常参考区间:抑制率≤ 16%
IPA法的正常参考区间:毒素结合量< 0.5 nmol/L


差异样本分析:


ELISA阳性,IPA阴性:8例血清在ELISA法中呈阳性(抑制率范围为18 ~ 46%),而在IPA法中呈阴性(0.33 ~ 0.47 nmol/L毒素结合量)。


ELISA阴性,IPA阳性:4例血清样本在IPA法检测中呈阳性(0.56、0.61、1.44和2.91 nmol/L毒素结合量),在ELISA检测中呈阴性(抑制率分别为14%、15%、8%和-1%)。在4个血清样本中,其中两例的双方法学检测结果都处于临界值附近;另外两例在IPA结果中,为AChR Ab弱阳性值 (1.4 和2.9 nmol/L),这两个样本在IPA法检测时被发现与胎儿型乙酰胆碱受体结合(数据未显示),可能表明这两个样本中的AChR Ab结合到了我们ELISA实验中使用的3种单抗无法识别的位点上。


03   特异性分析


在其他疾病对照组和健康对照组的检测中,ELISA法和IPA法的定性结果始终保持一致。


其他疾病对照组:在93例其他自身免疫性疾病患者(详情见前面入组样本部分)中,91/93例(特异性 98%患者测结果为AChRAb阴性。两例患者检测结果为AChRAb阳性,分别为一例Graves病患者(ELISA法显示28%抑制率,IPA法结果为1.3nmol/L 毒素结合量 )和一例系统性红斑狼疮(SLE)患者(ELISA法显示44%抑制率,IPA结果为1.3nmol/L 毒素结合量)。


健康对照组:100例健康供血者中,100例(特异性 100%)均为抗体阴性。


03   批内和批间精密度分析


竞争法AChR Ab酶联免疫吸附试验的批间变异系数(CV)如下:



竞争法AChR Ab酶联免疫吸附试验的批间和批内变异系数(CV)结果显示,低浓度样本的批间和批内差大于高浓度的样本,是由于低浓度样本的平均值偏小,CV的计算公式为标准差除以平均值。


原文:Hewer R ,   Matthews I ,   Shu C , et al. A sensitive non-isotopic assay for acetylcholine receptor autoantibodies[J]. Clinica Chimica Acta, 2006, 364(1-2):159-166.



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