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VGCC 抗体标本的采集及保存
发布时间:2022-08-28   点击次数:40次
  探讨血清电压门控钙通道(voltage-gated calcium channel, VGCC)在带状疤疹中的意义,为临床更好的治疗带状疤疹(herper zoste,HZ)以及预防带状疱疹后神经痛(post herpetic neuralgia,PHN)的发生提供理论依据。方法:收集带状疤疹患者50例,在人院、出院当天采用视觉模拟评分法(visual analoguescale, VAS)进行疼痛评分及ELISA法检测血清中VGCC抗体的浓度,于出院后1月随访是否发生PHN。检测20例健康志愿者血清VGCC抗体的浓度为对照。
 
  VGCC 抗体应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中VGCC水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入VGCC抗原、生物素化的抗人VGCC抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的VGCC呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
 
  VGCC 抗体标本的采集及保存:
 
  1.细胞培养物上清:请离心后收集上清,并将标本保存于-20℃,且应避免反复冻融。
 
  2.血清:标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
 
  3.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8°C 1000xg离心15分钟,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
 
  注:标本溶血会影响检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
 
  4.组织匀浆:将动物的组织标本先用PBS洗涤,去除多余血液,匀浆化后放在20mIPBS中于-20° C放置过夜,第二天,经过二次反复冻融破膜,将匀浆物5000xg离心5分钟,取上清即可检测。
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