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第三代促甲状腺激素受体抗体检测产品的性能评估
发布时间:2022-10-17   点击次数:263次

 

 

Graves病患者血清中,TSH受体自身抗体(TRAb)的病理作用已经明确。目前,检测TSHR自身抗体有两种方法。一种方法是基于类似TSH的自身抗体在细胞系中诱导第二信使cAMP的能力,称为生物测定(bioassay)方法,该方法能够根据其增强或抑制cAMP合成的生物活性来区分刺激性抗体(TSAb)和阻断性抗体(TSBAb)。另一种方法是基于猪TSHR或人类重组TSHR的TRAb检测,患者血清中的TRAb和牛TSH(用I-125或生物素标记)共同竞争TSHR上的结合位点。

 

Smith博士(RSR公司创始人)初次报道了一种测定血清TRAb的新方法[1],其中,患者血清中的TRAb可与生物素标记的促甲状腺激素受体人单克隆刺激型抗体M22[1]产生竞争,抑制M22与ELISA板孔上包被的TSHR的结合,以竞争抑制法构建酶联免疫吸附试验(ELISA)[2]。

 

本研究旨在比较两代和三代TRAb检测方法的性能差异,二代为抗体竞争抑制TSH,三代为抗体竞争抑制M22。此外,我们评估了三代TRAb检测产品在鉴别未经治疗的Graves病(GD)患者和无痛性甲状腺炎(PT)患者上的应用前景。

 

 

 

 

研究对象

 

 

 

 

 

 

检测方法

 

图1展示了基于M22的测定(表述为第三代TRAb,以TRAb3rd表示)和基于抑制TSH-生物素的测定(表述为第二代TRAb测定,以TRAb2nd表示)的检测原理。

 

图1 二代和三代TRAb检测原理。二代TRAb利用待测TRAb与TSH-生物素形成竞争抑制,抑制其与固相TSHR结合;三代TRAb利用待测TRAb与M22-生物素形成竞争抑制,抑制其与固相TSHR结合。

 

临界值定义以及统计分析

 

研究分析了230名健康对照者的血清抗体,只有1名(0.43%)对M22结合值的抑制率大于临界值15%(32.8%)。

 

从244例未经治疗的GD患者中计算灵敏度(真阳性结果),并从三个对照组中计算特异性(真阴性结果)。二代TRAb检测特异性*,灵敏度99.2%时,抑制率临界值为22%。


为了确认三代TRAb产品的临床临界值,我们对244例未经治疗的GD患者(疾病组)和三个不同对照组(下表)进行了检测,并对检测结果进行了ROC曲线分析。

 

 

第三代TRAb检测在三组对照中的抑制率临界值分别为14.5%(a)、22.0%(b)和22.0%(c),灵敏度均为99.6%,特异性分别为99.6%(a)、96.6%(b)和97.5%(c)(图2)。

 

图2 三代TRAb不同对照组间ROC曲线。a:疾病组+对照组1;b:疾病组+对照组2;c:疾病组+对照组3。

 

根据结果建议三代TRAb抑制率临界值为15%。

 

二代和三代TRAb检测对比

 

在15%的临界值下,第三代TRAb对于新诊断GD、PT和SAT患者的血清样本灵敏度和准确性与第二代相比如表1所示,数值分布如图3所示。

 

图3 二代与三代TRAb在不同患者组间检测数值分布图

注:a组为三代TRAb分别在GD、PT以及SAT三组间检测值分布;b组为二代TRAb在三组间分布。

 

在244例未经治疗的Graves病患者中,三代检测与二代检测结果高度相关(r=0.911),但三代检测(243例,99.6%)的抗体阳性率高于二代检测(242例,99.2%)。在对照组中,三代检测在9.2%的PT组和6.7%的亚急性甲状腺炎(SAT)组中检出抗体;二代检测在16.8%的PT组和13.3%的SAT组中检出抗体。

 

表1 二代与三代TRAb在三个疾病组间阳性率的比较

 

综合来看,三代TRAb在GD组检出率更高,PT组和SAT组检出率更低,整体性能更优。与二代检测相比,三代检测对GD和PT的诊断准确性显著提高(p=0.0026)。

 

图4 二代与三代TRAb间结果相关性比较。横轴为三代TRAb,纵轴为二代TRAb。

 

 

 

 

讨论

 

甲状腺功能亢进的流行病学数据差异较大。在日本等碘摄入量高的国家及地区,大多数甲状腺毒症病例是由GD和PT引起的,而在碘摄入量低的地区,GD和毒性多结节性甲状腺肿是甲状腺功能亢进的常见原因[4]。在目前的临床实践中,需要在甲状腺毒症患者中检测TRAb以鉴别GD患者。在本研究中,我们证实了基于M22-生物素竞争抑制的ELISA方法(三代TRAb)在诊断GD以及鉴别GD和PT引起的甲状腺毒症患者方面的高灵敏度。

 

Smith博士等人[1]对基于TSH的ELISA和基于M22的ELISA进行了比较,证实基于M22结合抑制的作用更明显,从而提高了检测的灵敏度和精确度。在本研究中,我们证明了在未经治疗的244例Graves病患者中,M22与TSHR的结合抑制效果,与TSH与TSHR的结合抑制效果高度相关(r=0.911)。此外,在244例未经治疗的GD患者的血清中,三代TRAb对GD的诊断灵敏度为99.6%,高于二代TRAb的99.2%。在我们的PT患者组中,第三代TRAb检测显示阳性率为9.2%,而二代TRAb为16.8%。虽然其原因尚不清楚,但可能的机制似乎涉及其在TSHR上不同的结合位点。有趣的是,在三代检测结果中,119例PT患者中有8例观察到抑制率结果高于50%,对此还需要进一步开展人甲状腺刺激阻断性抗体(TSBAb)检测等研究。

 

我们的结果最终表明,在患有GD和PT的甲亢患者中,基于M22第三代TRAb检测的准确性为96.7%,显著优于第二代TRAb准确性为93.9%(p=0.0026)。尤其是在GD和PT患者的鉴别诊断上,三代检测性能显著优于二代。新方法的在预测停药后GD的预后情况,以及自身抗体与Graves眼病的关系上的临床价值有待进一步发掘。

 

 

使

 

二代TRAb(国械注进20152403732   点击下载

三代TRAb点击下载

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参考文献:Kamijo K ,   Ishikawa K ,   Tanaka M . Clinical Evaluation of 3rd Generation Assay for Thyrotropin Receptor Antibodies : The M22-biotin-based ELISA Initiated by Smith[J]. Endcor J, 2005, 52.

 

 

 

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