要点
1. 在阿尔及利亚小于35岁的160例T1DM患者中，ZnT8 Ab检出率46.25%。
2. 在28例其他抗体阴性的患者中，ZnT8 Ab检出率50%，增加ZnT8 Ab检测后使T1DM中抗体检出率由82.5%提升至91.25%。
3. ZnT8 Ab在≤18岁患者中检出率和浓度水平更高。
研究表明ZnT8 Ab是1型糖尿病鉴别诊断的良好工具和重要的补充标志物。
1型糖尿病(Type 1 diabetes mellitus, T1DM)是一种慢性疾病，主要表现为胰岛β细胞功能损伤导致胰岛素分泌不足。T1DM占所有糖尿病类型的5%至10%，但在儿童中则是最常见的慢性疾病。2010年，欧洲大陆14岁以下的发病率为5 - 10例/10万人。芬兰和撒丁岛的发病率最高，每年分别超过60例/10万和40例/10万。印度和委内瑞拉的发病率低，为0.1例/10万/年。在阿尔及利亚，1型糖尿病的发病率为每年30例/10万。
T1DM的特点是参与细胞免疫，具有与HLA基因相关的遗传易感性以及存在特异性循环自身抗体[4]。自身抗体可以预测遗传易感人群的糖尿病发病率，也可以用于1型糖尿病的鉴别诊断。1型糖尿病有不同亚型，“1A"型在疾病起始阶段即存在糖尿病相关自身抗体；除免疫介导外，在年轻患者中出现其他形式的胰岛素缺乏可根据疾病特征定义为 “1B"特发型、单基因糖尿病“MODY"型和新生儿糖尿病，对应β细胞破坏和/或功能障碍。至少一种自身抗体(GAD Ab、IA2 Ab、IAA)的存在是β细胞因自身免疫性凋亡致病的标志[6]。近年来，锌转运蛋白8 (ZnT8)被确定为人类1型糖尿病的一种新型自身抗原[7,8]。它由SLC30A8基因编码，是一种胰岛β细胞分泌颗粒膜蛋白[9]。由于阿尔及利亚人群中没有ZnT8 Ab的报道，本研究的目的是评估ZnT8 Ab在阿尔及利亚小于35岁1型糖尿病患者中的检出率，并评估ZnT8 Ab测定在1型糖尿病诊断中的重要性。
方法
患者
2014年9月至2016年6月，招募160名来自阿尔及利亚的阿尔及尔市两家医院的糖尿病门诊和儿科的患者。
纳入标准为：年龄小于35岁；和/或合并酮症；和/或在T1DM起始时存在自身抗体和严重的胰岛素依赖。
抗体检测方法
抗体检测采用商品化试剂盒。GAD Ab、ZnT8 Ab、IA-2 Ab、IAA为酶联免疫法（ELISA）；ICA为间接免疫荧光法（IIF）。
结果
1. 患者一般特征
160例患者的一般特征见表1a和表1b。患者性别(女：男）比率为1.16，抗体测定时的中位年龄为14.09岁，糖尿病病程中位数为4.1年。
表1 160例阿尔及利亚1型糖尿病患者的一般特征
注：HbA1c糖化血红蛋白，正常范围4.3-5.7%；FBG空腹血糖，正常范围0.7-1.1 g/L（3.9-6.1 mmol/L)。
2. 抗体的检出率
在160例患者中，146例（91.25%）患者至少检测到1种抗体阳性。14例患者（8.75%）未检测到抗体，4例患者（2.5%）所有抗体均呈阳性。
在全部160例患者中，74例（46.25%）患者中检测到ZnT8 Ab阳性，53.125%患者GAD Ab阳性，32.5%患者IA2 Ab阳性，31.25%患者IAA阳性，15%患者ICA阳性 。
本研究观察到，有28/160（17.5%）的患者未检测到GAD Ab、IA2 Ab、IAA、ICA 4项抗体，在这28例患者中，有14例（50%）检测到ZnT8 Ab阳性。
表2 160例阿尔及利亚1型糖尿病患者ZnT8 Ab阳性和ZnT8 Ab阴性中特定抗体的检出率
3. 自身抗体存在的相关因素
1）性别
整体抗体阳性率在性别上存在显著差异。女性中抗体阳性率（94.16%）高于男性中抗体阳性率（75.67%；p=0.01）。对于ZnT8 Ab，女性中ZnT8 Ab阳性占比（70.3%）显著高于男性中占比（10.7%；p＜0.00001）（表3）。女性患者ZnT8 Ab的浓度高于男性患者（女性=122.5 UI/mL，男性=51.38 UI/mL；p<0.05）（图1a）。然而，其他抗体（ICA、GAD Ab、IA2 Ab、IAA）的阳性占比在男性和女性之间无显著差异。
表3 160例阿尔及利亚1型糖尿病患者中ZnT8 Ab相关因素
图1 a：根据性别绘制ZnT8 Ab浓度的均值图 b：根据血缘关系（是否近亲结婚所生）绘制ZnT8 Ab浓度的均值图。No:父母无血缘关系的患者；Yes:父母有血缘关系的患者。
2）年龄
根据年龄，患者被分为了3个组：
第一组：小于10岁（儿童）
第二组：10岁-18岁（青少年）
第三组：大于18岁（青年）
IA2 Ab、ZnT8 Ab在青少年和儿童中的检出率显著高于青年。GAD Ab、IAA、ICA在3组中的检出率接近。
ZnT8 Ab阳性患者的平均年龄为12.24岁，ZnT8 Ab阴性患者的平均年龄为16.67岁(p<0.0001)(表3)。年龄小的患者中ZnT8 Ab浓度较高(p＜0.00001)（图2a）。
图2 各因素与ZnT8 Ab平均水平(UI/mL)间的关系：图a:根据年龄(岁); b:根据体重指数(kg/m2);c:根据出生体重(g);d:根据空腹血糖水平(g/L);e:根据糖化血红蛋白水平。
3）糖尿病病程
根据糖尿病病程，患者被分为3组：
第一组：病程小于2年
第二组：病程3-10年
第三组：病程大于10年
观察到抗体的检出率有显著的时间依赖性衰减：第一组抗体检出率89.18%；第二组抗体检出率84.84%；第三组抗体检出率25%（p=0.01）。
4）近亲结婚
父母是近亲的患者中GAD Ab、ZnT8 Ab和ICA检出率更高。由图1b可知，父母为近亲的患者中ZnT8 Ab的浓度也显著更高（199.31 UI/mL vs 61.88 UI/mL，p<0.01）。
5）喂养方式
6月龄以下的人工喂养患儿与母乳喂养患儿相比，ZnT8 Ab检出率更高(p<0.01)，但浓度无显著差异(p = 0.823)(表3)。其他抗体在患者出生时喂养方式上无显著差异。
6）身体质量指数（BMI）
所有抗体阳性检出率与BMI无相关性(表3)；而在低BMI患者中，GAD Ab、IA2 Ab、IAA、ZnT8 Ab的浓度显著较高(图2b)。
7）出生体重
所有抗体阳性检出率在出生体重上无显著性差异(表3)。
8）空腹血糖（FBG）
ZnT8 Ab阳性患者中空腹血糖水平更高，高ZnT8 Ab浓度水平患者中空腹血糖水平更高（表3和图2d）。
9）糖化血糖蛋白（HbA1c）
ZnT8 Ab抗体水平在高HbA1c水平患者中更高 (图2e)。
10）其他因素
对家族病史和相关的自身免疫性疾病进行研究，没有观察到与自身抗体的相关性。
讨论
自身抗体是低体重患者鉴别诊断T1DM有效的工具[17]。在本研究队列中，在91.25%的患者中至少发现了一种抗体，这与先前的研究一致，证实在80%至90%的T1DM患者中至少存在一种自身抗体[20,21]。抗体阴性的患者占8.75%。既往研究中抗体阴性的糖尿病发病率为4% - 10%[22]。
在本研究队列中，ZnT8 Ab在小于35岁T1DM中的检出率为46.25%。遗传和环境因素可能导致T1DM在人群中的发病率和临床特征不同[5]。一项中国的研究显示年龄在1 - 70岁的新发T1DM患者中ZnT8 Ab的检出率为24%，HLA基因型或其他种族间遗传标记的差异、纳入患者年龄范围大被认为是这一低检出率的可能原因[14]。同样，一项来自巴西的研究招募了年龄在19 - 32岁T1DM人群，发现24%的ZnT8 Ab阳性[15]。在5 - 34岁的急性发病的日本T1DM患者中和1 - 18岁的土耳其T1DM患者中ZnT8 Ab阳性率为58%[24]。
在本研究28例GAD Ab、IA2 Ab、IAA和ICA评估结果阴性患者中，50%（14例）患者检测出ZnT8 Ab阳性。该结果与Tihamar等人[25]的研究一致。增加ZnT8 Ab的检测，使在本队列中自身抗体阴性受试者的比例从17.5%降低到8.75%。在另一项研究中，自身抗体阴性受试者的比例从6%降低到小于2%[26]。
本研究还表明，ZnT8 Ab在年轻（≤18岁）患者中检出率更高，ZnT8 Ab浓度水平更高。这与Brasil Gomes等人的研究一致，他们的结论是ZnT8 Ab是1型糖尿病，特别是在年轻患者疾病诊断中的有效标志物 [37]。
本研究中关注到母乳喂养与自身抗体缺乏之间的相关性，ZnT8 Ab在人工喂养的患者中更常见。这与瑞典的一项研究相一致，该研究证明，长期纯母乳喂养的儿童患1型糖尿病的风险可能低于其他非母乳喂养儿童[44-46]。
结论
本研究是初次对阿尔及利亚T1DM患者进行ZnT8 Ab研究，得到ZnT8 Ab检出率为46.25%。ZnT8 Ab阳性能将50%的常见糖尿病相关自身抗体阴性的糖尿病患者进行准确识别，表明ZnT8 Ab是1型糖尿病鉴别诊断的良好工具。
原文：Boudiaf A L , Bouziane D , Smara M , et al. Could ZnT8 antibodies replace ICA, GAD, IA2 and insulin antibodies in the diagnosis of type 1 diabetes?[J]. Current Research in Translational Medicine, 2018, 66(1).
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