【产品名称】
通用名称：谷氨酸脱羧酶抗体（GADAb）检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：GADAb ELISA Kit

【包装规格】
96 测试x 1

【预期用途】
谷氨酸脱羧酶抗体（GADAb）检测试剂盒（酶联免疫法），用于定量测定人血清中谷氨酸脱羧酶抗体（GADAb）的含量。胰岛β细胞抗原的自身抗体是1 型糖尿病（Type 1 Diabetes Mellitus）的重要血清学标志物。可被识别的胰岛β细胞抗原包括：胰岛素、谷氨酸脱羧酶（GAD）、胰岛素瘤抗原-2（IA-2）和锌转运体8（ZnT8）等。

【检测原理】
本试剂盒应用酶联免疫法定量测定人血清中谷氨酸脱羧酶抗体（GADAb）水平。主要检测原理是依据GADAb 的Y 型结构在其两侧臂都具有抗原结合点，一侧同包被在微孔的固相抗原GAD65 结合，另一侧同生物素化的液相抗原GAD65 结合，从而形成桥式结构。随后加入的过氧化物酶标记的链霉亲和素与被固定在GADAb 一侧的生物素结合。洗掉未结合的酶标记物后，添加底物TMB 产生蓝色，添加终止液后反应终止显黄色。使用酶标仪在405nm 和450nm 波长下测定吸光度值（OD
值），计算样品浓度。较高的吸光值意味着被检测样本中存在GADAb。检测范围：5-2000U/mL（NIBSC 97/500 浓度单位）。

【主要组成成分】
产品组成：微孔板，生物素标记的GAD65 及其复溶缓冲液，酶标记物（SA-POD）及其稀释液，底物液（TMB），浓缩洗涤液，终止液，校准品，阳性质控品，阴性质控品。

检测需要但试剂盒未提供的材料
1. 能调剂25μL 和100μL 的移液器。
2. 能够定量复溶或稀释试剂体积的方法。
3. 纯水。
4. 具有405nm 和450nm 检测波长的酶标仪。
5. ELISA 孔板振动器（可达500 次/分钟的非垂直振动器）。
6. ELISA 孔板盖。

【储存条件及有效期】
1. 未开封试剂盒置于2-8°C 可保存12 个月（有效期详见试剂盒）。
2. 微孔板：包装开封后但未使用的板条需放回原铝箔袋，加入干燥剂，密封后放入自封口塑料袋，
在2°C-8°C zui多可稳定保存16 周。
3. 生物素标记的GAD65：复溶后的生物素标记的GAD65 在2°C-8°C zui多可稳定保存3 天。
4. 酶标记物：已稀释的酶标记物在2°C-8°C zui多可稳定保存16 周。
5. 洗涤液：已稀释的洗涤液在2°C-8°C 可保存至试剂盒有效期。

【适用仪器】
酶标仪（含405nm，450nm 波长）

【样本要求】
1. 待分析血清应该在经过分离后立即检测或储存（建议分装）于-20°C 或更低温度。单次检测仅需50μL 样本血清（建议复孔检测，每孔25μL）。
2. 避免重复冻融或储存温度升高。
3. 请勿使用脂血或溶血样本进行检测。
4. 请勿使用血浆进行检测。
5. 需要时，在室温下解冻待测血清样本并轻轻混合以确保均一性。
6. 检测前用离心机分离血清（建议用微型离心机转速在10,000~15,000xg，离心5 分钟），以去除微粒物质。如果血清浑浊或包含微粒，请勿省略此离心处理步骤。

【检验方法】
使用前使所有试剂在室温（20~25°C）下搁置至少30 分钟。建议在步骤4、7、10、11 中使用Eppendorf连续加样器。
1.加入25μL 患者血清、校准品、阴性质控品和阳性质控品到各自孔中，一式两份。预留一个空白孔。（见步骤12）。
2. 盖上孔板盖，室温条件下，在ELISA 孔板振动器（500 次/分）上振荡1 小时。
3.用ELISA 孔板洗涤器抽出试剂并用稀释后的浓缩洗涤液清洗孔板3 次。如手工洗板，迅速倒扣孔板于适当托盘上以丢弃孔内液体。手工洗板三次并在清洁干燥的吸水表面上拍干孔板。
4.用移液器加入100μL 复溶的生物素化的GAD65 于每个孔内（空白孔除外）。添加过程中避免液体飞溅到孔外。
5. 盖上孔板盖，室温条件下，在ELISA 孔板振动器（500 次/分）上振荡1 小时。
6. 重复清洗步骤3。
7. 用移液器加入100μL 稀释的酶标记物于每个孔中（空白孔除外）。
8. 盖上孔板盖，室温条件下，在ELISA 孔板振动器（500 次/分）上振荡20 分钟。
9. 重复清洗步骤3。如手工清洗，在拍干孔板前，额外用纯水清洗一次，以去除泡沫。
10 用移液器加入100μL 底物液于每个孔内（包括空白孔），在室温条件下避光静止孵育20 分钟。
11 用移液器加入100μL 终止液于每个孔内（包括空白孔），盖上孔板盖，振动大约5 秒钟。确保每个孔的反应同时终止。
12 在反应终止后五分钟内，用酶标仪分别在450nm 和405nm 波长下读取每个孔的吸光值，并扣除仅包含100μL 底物液和100μL 终止液的空白孔吸光值。

【临界值】
临界值U/mL
阴性<5U/mL
阳性≥5U/mL

【检测结果分析】
以校准品浓度为X 轴（对数模式）和以校准品的吸光度为Y 轴（线性模式）建立标准曲线。RSR
绘成对数/线性Spline 曲线，平滑系数为0。根据标准曲线可以读出样本血清的GADAb 浓度。亦可
使用其他数据处理系统。可赋予阴性质控品浓度为0.5U/mL 来辅助电脑分析检测结果。由于大多数
测试血清的浓度会低于250U/mL，所以可以省略2000U/mL 校准品。抗体浓度高的样本可用GADAb
阴性血清或试剂盒阴性质控品或RSR 额外提供的稀释剂进行稀释。例如，20μL 样本加上180μL
稀释剂得到10 倍稀释液。其他稀释倍数（例如100 倍）可以从10 倍稀释液制备或视情况而定。参
照试剂盒的校准品（按照NIBSC 97/550 标准），某些血清的稀释不会呈线性变化。

【产品性能指标】
临床特异性和灵敏度
在DASP2005 研究中，本试剂盒特异性为98%（n=100），灵敏度为92%（n=50）。
zui低检测限
检测试剂盒阴性质控品20 次，计算平均值和标准差。在2 倍标准差时检测下限是0.57U/mL。

【注意事项】
1. 本品仅供体外诊断使用，操作应严格按照说明书进行。
2. 所有试验需在20~25°C 下进行，应避免由日光照射机器或周围仪器发热引起的高温。
3. 使用新的吸头用于阳性质控品、阴性质控品、校准品和待测样本的操作。
4. 不能混用其他制造商的产品。
5. 取出所需数量的微孔条，包装开封后但未使用的板条需放回原铝箔袋，加入干燥剂，密封后放
入自封口塑料袋，保存于2~8°C。
6. 将酶反应物底物加入微孔后，酶标板需立即放置于黑暗处。
7. 操作前应仔细阅读本说明书并严格按照其指示操作，否则可能会导致错误的检测结果。
8. 废弃样本和废液的处理应遵照相应的生物安全和有毒有害物质管理规定。

【生产企业】
制造商名称：RSR Limited
生产地址及注册地址：Avenue Park, Pentwyn, Cardiff, CF23 8HE, United Kingdom
：www.rsrltd。。ｃｏｍ 
售后服务机构名称：天津阿斯尔生物科技有限公司
售后服务机构地址：天津滨海高新区华苑产业区海泰发展六道6号海泰绿色产业基地J座312 室
售后服务机构：+86 22 8372 6755
【医疗器械注册证书编号】国械注进20152401578