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ELISA检测锌转运蛋白8自身抗体在中国人群1型糖尿病诊断中的应用
发布时间:2023-01-10   点击次数:111次

通讯作者:刘宽芝     

作者单位:河北医科大学第三医院


RSRTJ翻译,仅供学习参考


1型糖尿病(T1D)是一种器官特异性自身免疫性疾病,与针对胰腺β细胞的自身免疫反应有关。检测针对胰腺β细胞抗原的自身抗体有助于辅助诊断 T1D,如谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、抗胰岛素自身抗体(IAA)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)和锌转运蛋白 8 (ZnT8) 抗体。在 T1D 的常规诊断过程中加入 ZnT8A检测会提高整体自身抗体的检出率[2]。然而,ZnT8A的检测在中国医学领域并不常见。本研究使用易于实施且应用方便的酶联免疫吸附试验 (ELISA) 对ZnT8A进行检测,旨在评估ZnT8A在中国人群 T1D诊断中的应用价值。



患者招募(2014年1月至2016年4月)


抗体检测


ELISA法检测ZnT8A


本研究中,ZnT8A单项标志物对诊断 T1D 的灵敏度为25.3%,特异性为99.6%(临界值15 U/ml)。通过 ELISA 检测 ZnT8A 的 ROC曲线如图1所示。曲线下面积(AUC)0.892(95% CI 0.853~0.930)表明该测试具有较高的准确性。


糖尿病抗体标准化计划(IASP)通过放射配体法检测ZnT8A,得到的 ROC-AUC 中位数为 0.848 [25]。Dunseath等[13] 在 1 型糖尿病患者和健康献血者中通过 ELISA 对 ZnT8A 进行 ROC 曲线分析,结果显示 AUC 为 0.80,灵敏度为 54%,特异性为 99%。


因此,我们推测ELISA的ZnT8A测试可能具有较高的准确性。此外,ELISA检测ZnT8A作为一种简便、可重复的方法,具有高度的特异性,可能适合更广泛的临床应用。


图 1 用于1型糖尿病的ZnT8抗体筛查试验的ROC曲线。


ZnT8A检测结果


1. 糖尿病患者及健康对照组的ZnT8A检测结果


T1D患者的ZnT8A水平高于T2D患者和健康对照组。



2. T1D患者不同亚型的ZnT8A检测结果


“经典" 1 型糖尿病患者中 ZnT8A 的阳性检出率高于LADA患者(45.0 vs. 18.7%,p < 0.05)。与之前报道的文献一致[19]。“经典" 1 型糖尿病患者的 ZnT8A 水平高于 LADA 患者(中位数 14.00 vs, 13.42,Z =- 2.013,p = 0.044)。



ZnT8A检出率的影响因素


1. 年龄


Lampasona [20] 报道,在 GADA 和/或 IA-2A 阳性的自身免疫年轻患者中 ZnT8A 阳性的检出率较高,并且随着年龄的增长而下降:在 0-49岁的受试者中阳性率为 12.2%;而在 49.1-58.8岁受试者中降至 6.6%;年龄> 58.9 岁的受试者中阳性率仅 4.4%。我们发现 ZnT8A 在 18 岁以下的T1D患者中的阳性检出率和抗体水平均最高,其余为 18-40 岁T1D患者和 40 岁以上T1D患者(p < 0.05)。后两者在ZnT8A 阳性率和 抗体水平上无显著差异。这与 Vaziri-Sani 等人先前发表的报告一致,他们发现2~17岁T1D患者的ZnT8A 水平显著高于15~34岁T1D患者。


另一项针对 15 岁以下新诊断为糖尿病的儿童和青少年的研究报告称,ZnT8A 阳性检出率与年龄较大有关 [22]。据报道,在中国和比利时的 T1D 患者中,ZnT8A 的检出率随着诊断年龄的增加而下降 [17, 23]。此外,在 T1D 发病后 6 个月内,法国6-10 岁儿童的 ZnT8A 检出率高于其他年龄较大的患者 [5]。本研究中,ZnT8A 阳性组的诊断年龄小于 ZnT8A 阴性组。然而,ZnT8A 检出率随着发病年龄的增长而增加,在 8-16 岁时达到一个平台,然后下降 [24]。综上所述,诊断年龄可能在 ZnT8A 检出率中起重要作用。


本研究ZnT8抗体的阳性率和抗体水平:


2. 地理、种族差异和疾病诊断标准


作为一种新型的β细胞特异性自身抗体,ZnT8A在T1D的筛选中具有广泛的临床应用价值[12]。ZnT8A 在全球T1D患者中的阳性率差异大(如下表)。LADA 患者中 ZnT8A 的不同检出率可能是受地理、种族差异和疾病诊断标准不同影响。在中国,LADA的诊断需要T1D的起病年龄≥18岁,而其他地区LADA的诊断通常需要T1D起病年龄≥30岁。本研究招募的 75% 的 T1D患者是 LADA 患者,“经典" T1D患者的比例非常小,可能会影响一些结果,例如 T1D患者中 ZnT8A 的检出率。



3. 病程


杨等人 [17] 发现糖尿病病程与受试者 ZnT8A 的检出率没有差异。本研究中 ZnT8A+ 和 ZnT8A- 的T1D患者的病程没有差异。也有不同结果的报道称:61% 的新发病的T1D患者 ZnT8A 呈阳性,而6 个月以上病程的 T1D 患者中ZnT8A检出率降至 33%[5]。由于 ZnT8A 水平从 T1D 的临床发病后呈指数级下降,本研究中 ZnT8A 的低检出率可能是由于纳入了病程较长的 T1D 患者。糖尿病病程与 ZnT8A 检出率之间的相关性值得进一步探索。同时,还需要一些纵向研究来动态监测中国 T1D 患者的 ZnT8A 水平。


ZnT8A与临床体征:


Mbanya等人[28] 表明 ZnT8A 阳性糖尿病患者的 BMI 明显低于 ZnT8A 阴性患者。在本研究中同样观察到了类似的趋势,支持了更瘦的糖尿病患者可能更容易检测出ZnT8A 的观点。


ZnT8 具有高度β细胞特异性,ZnT8A引起的自身免疫损伤可能导致严重的胰岛素缺乏。芬兰的一项研究发现,与 ZnT8A 阴性的同龄人相比,ZnT8A 阳性儿童的血清 C 肽浓度较低,胰岛素治疗剂量较高,并且更容易发生酮症酸中毒 [22]。本研究中也发现了相同的趋势。因此,ZnT8A 阳性可能反映了一种侵袭性更强的T1D。


与 ZnT8A 阴性的T1D患者相比,ZnT8A 阳性 的T1D患者诊断时年龄较小 (p = 0.022),BMI 较低 (p = 0.016),酮症酸中毒更频繁 (p = 0.034),更高的胰岛素治疗需求 (p = 0.041)。但两组的糖尿病病程、FBG、HbA1c 和血脂(胆固醇、甘油三酯、LDL-C 和 HDL-C)水平无显著差异。这一发现与 Mbanya 等人[28]和中国的另一项研究报告[17]的结论一致。


T1D 患者的病史、体征、代谢特征:


ZnT8A与GADA之间的关系:


T1D患者抗体检测结果:


ZnT8A 作为 T1D 的一个额外且独立的预测标志物,在GADA、IA-2A、IAA 和 ICA均阴性的 T1D患者中的阳性检出率为26% [26]。此外,据报道,临床表型为 T2D 的患者中 ZnT8A 的阳性检出率为 1.99%,ZnT8A 检测可提高基于 GADA 和 IA-2A 阳性 LADA 的诊断检出率[27]。因此,ZnT8A检测可用于鉴别区分 LADA 和青年发病的T2D ,有助于 LADA 患者的精确诊断和早期胰岛素治疗方案的抉择。ZnT8A 水平与 GADA 水平相关(相关系数 = 0.447,p = 0.000)。ZnT8A 和 GADA 的组合将诊断灵敏度从 56.8%(GADA 阳性)提高到 64.2%。目前GADA 测试在中国基本已经普及,我们建议应尽快引入 ZnT8A检测。此外,之前有报道称 ZnT8A 与高 GADA 滴度相关 [20]。我们发现 ZnT8A 水平与 GADA 水平相关。


总结:

ZnT8A检测对于T1D和LADA患者的筛查具有重要的价值,该抗体的补充对于提高抗体检出率具有重要价值。ELISA检测ZnT8A作为一种简便易行的方法,可信度高,在T1D诊断中具有广泛的临床应用潜力。



原文文献:Qiu X ,   Ning C ,   Xiao L , et al. Zinc transporter 8 autoantibody (ZnT8A) by ELISA for diagnosing type 1 diabetes among Chinese people[J]. International Journal of Diabetes in Developing Countries, 2018.







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