TitinAb试剂盒在使用前,需将试剂盒内所有试剂平衡至室温,严格按照说明书规定的操作步骤和时间进行实验,避免试剂污染和交叉反应。样本的采集和处理也至关重要,应遵循无菌操作原则,避免溶血、反复冻融等情况,以保证检测结果的准确性。
TitinAb试剂盒测定步骤:
1.准备阶段:
-试剂平衡:将试剂盒从冰箱中取出,室温平衡20分钟左右,使试剂的温度与实验环境一致。
-样本准备:根据实验需求,收集并处理样本,如血清、血浆等,确保样本质量符合实验要求。
-工作液配制:按照说明书的要求,配制洗涤液、酶标抗体工作液等所需工作液。注意洗涤液如有结晶,需水浴加热使其溶解后再使用。
2.加样与孵育:
-加样:在酶标包被板上设标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍)。然后迅速在各孔中加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体50μL,加盖或覆膜,轻轻振荡混匀。
-温育:将包被板放入37℃水浴箱或恒温箱中,温育60分钟。
3.洗涤与显色:
-洗涤:弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置1分钟,甩干,如此重复洗板5次。
-显色:每孔加入底物溶液90μL,酶标板覆膜后置于37℃避光环境中反应25-30分钟。
4.终止与测定:
-终止反应:每孔加入终止液50μL,终止反应。
-测定吸光度:在确保酶标板底无水滴及孔内无气泡后,立即用酶标仪在450nm波长处测量各孔的OD值。
5.结果计算与判断:
-绘制标准曲线:根据标准品的浓度和对应的OD值,绘制标准曲线。
-计算样本浓度:将样本的OD值代入标准曲线方程,计算出样本中TitinAb的浓度。
-结果判断:根据计算出的样本浓度和说明书中的参考值范围,判断样本是否为阳性或阴性。